|
1.仪器描述
仪器摆放位置：6#-205
固定资产编号：201348926
厂商型号：Agilent 1260
性能参数：
|
泵的原理
|
低压四元混合，集成高性能脱气元件
|
|
泵的延迟体积
|
600μl~800μl
|
|
流速范围
|
0.05—5ml/min（600bar）,5—10ml/min（200bar）
|
|
最大压力
|
600 bar
|
|
上样量
|
0.1~100μl
|
|
柱子规格
|
长度：最长300mm；ID：0.05~8mm
|
|
柱温箱温度范围
|
-5℃ ~ 80℃
|
|
自动进样器连续进样次数
|
1~99次
|
|
检测器波长范围
|
190 ~ 640nm
|
|
检测器狭缝宽度
|
4nm
|
负责人及联系方式：张蕾 34208024
耗材及存放位置：安捷伦液相小瓶；C18柱子。存放于药学院6#-205实验室。
2.开机前准备
2.1配置流动相
根据实验要求配制流动相，须经0.45μm滤膜过滤，之后再进行脱气处理，使用前必须用超声波振荡l0-15min，按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）、B中。
2.2样品预处理
对照品和样品溶液进样前要经0.45μm滤膜过滤。
3.开机
3.1打开计算机，进入 Windows 系统
3.2打开Agilent 1260 HPLC各模块电源开关（从上至下），待各模块自检通过并与计算机通讯成功（约1~2min）后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进入online工作站。
4.系统初始化（主要目的即为排气泡）
4.1把各流动相放入容积瓶中。
4.2打开Purge阀（逆时针），右击“泵”图标出现参数设定菜单，单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。
4.3设“流量”逐步增大流速至5ml/min ，A通道设到100%，单击“确定”。
4.4单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge，直到管路内由溶剂瓶A到泵入口无气泡为止；依次切换B、C、D通道(通道设到100%)，继续Purge直到所有通道管路内均无气泡为止。
4.5关闭Purge阀（顺时针），完成系统初始化。
5.平衡
5.1将泵的流量设到0.5ml/min，若使用双泵则应设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；再将流量设到0.8ml/min，2分钟后设定至方法所需流速，冲洗色谱柱20-30min。
5.2单击泵下面的瓶图标，输入溶剂瓶A、B内流动相的实际体积（为保护泵和色谱柱，请按实际体积输入）和停泵的体积单击“确定”，如果各溶剂瓶溶剂体积小于停泵体积，泵将自动停止。
5.3把缓冲液（用于柱子过渡的，与流动相等比例的乙腈/水、甲醇/水或10%的水溶液）换成流动相，排气后，逐步增加至所需流速，待柱压基本稳定后，打开检测器等，在“Online Plot”窗口中观察基线情况，至基线稳定后，点击“Balance”键进行基线调零。
6.编辑方法
6.1 编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”进入下一画面。
6.2 方法信息：在“方法注释”栏中输入方法的描述信息（如方法的用途等），单击“确定”进入下一画面。
6.3 泵参数设定：在“流速”处输入方法所需流量（如1ml/min）；默认为A为100%，如需二元高压，在“溶剂B”处输入所需比例,则溶剂A=100-B ，也可“插入”一行“时间表”编辑二元梯度；在“压力限”处输入柱子的最大耐高压（建议设定200bar）以保护柱子 ,单击“确定”进入下一画面 。
6.4 柱温箱参数设定：在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度，并选中它，右侧选中“与左侧相同”——使柱温箱的温度左右一致。
6.5 DAD检测器参数设定：在“波长”下方的空白处 输入所需的检测波长，如254nm，可同时输入多个不同波长；在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间（如>0.1min (2s)）；如有特殊要求，也可在“时间表”中可以“插入”一行输入随时间切换的波长（如1min 波长=300nm），点击“确定”。
6.6在“运行时选项表”中选中“数据采集”选项，单击“确定”。
6.7单击“方法”菜单选中“方法另存为”输入方法名，单击“确定”。
6.8 从“视图”菜单中选中“在线信号”，选中“信号窗口1”，然后单击“改变”钮,将所要查看的信号移到右边框中,单击“确定”。
6.9 进样器参数设定：在进样模式中输入“进样量”xxμl，默认为20μl。“标准进针”只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“针清洗后进样”可以输入进样体积和洗瓶位置为xx，此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。
7.运行样品
7.1单针进样
7.1.1选择“单针进样”图标。
7.1.2从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，在弹出的窗口中填写样品信息。 注意“样品位置”填写进样瓶的位置，并将样品放入对应的位置。
7.1.3点击画面中的“开始”运行方法，中间停止采样点“结束”。
7.2 序列进样
7.2.1“序列”下“序列参数”，设置同单针进样，样品位置不填。
7.2.2“序列”下选择“序列表”，在表格中可进行“插入”、“剪切”“复制”“粘贴”“追加行”等操作，表格中必须填写“样品瓶”“样品名称”“方法名称”“进样次数”“数据文件”“进样量”等信息，其他信息可选择编辑。编辑完成后，单击“确定”。在“序列菜单中选择“序列模板另存为”为新建序列命名。注意“样品位置”填写进样瓶的位置，并将样品放入对应的位置。
7.2.3在“仪器”菜单中选择“运行序列”运行当前序列。停止采集数据选择“仪器”菜单中“停止运行/进样/序列”。或者同单针进样的方法。
8.数据处理
8.1 从“视图”菜单中单击“数据分析”进入数据分析画面。
8.2从“文件”菜单选择“调用信号”选中所做的数据文件，单击“确定”，也可直接双击打开。
8.3做谱图优化：从“图形”菜单中选择“信号选项”，再从“范围”中选择“自动量程”及合适的显示时间单击“确定”或选择“自定义量程”调整,反复进行直到图的比例合适为止。
8.4积分优化
8.4.1从“积分”中选择“自动积分”, 若积分结果不理想,再从菜单中选“积分事件”选项，选择合适的“斜率灵敏度”、“峰宽”、“最小峰面积”、“最小峰高”。
8.4.2从“积分”菜单中选择“积分”选项，则数据被积分。
8.4.3如积分结果还不理想，则修改相应的积分参数直到满意为止。
8.4.4单击左边“保存并退出”图标将积分参数存入当前方法中。
8.5打印报告
8.5.1从“报告”菜单中选择“设定报告”选项。
8.5.2单击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角选中所采用的报告方法（如面积外标法等），单击“确定”。
8.5.3从“报告”菜单中选择“打印”则报告打印结果将显示在屏幕上，如想输出到打印机，则单击“报告”底部的“打印”钮即可。
9.关机
9.1关机前，用95%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，流量0.5-l.0ml/min，再用100%有机溶剂冲0.5小时，然后关闭系统。
9.2退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shutdown关）。
9.3关掉Agilent 1260 HPLC各模块电源开关。
10.注意事项
10.1氘灯是易耗品，应最后开灯，不分析样品即关灯。
10.2 流动相不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。
10.3 为了保护系统及色谱柱，每做完一次实验务必将系统内的缓冲液冲洗干净。
10.4 流速突然变大或变小会导致柱压的突然改变，时间久了柱子填料会坍陷或松动，最终柱压下降，所以泵开始和结束前要注意缓慢改变流速。
10.5 流动相使用前必须进行脱气处理，可用超声波震荡10~15min。
10.6 不要在系统中长期留存100%乙腈。
10.7 在没有色谱柱流动相流动的情况下，不要使柱温箱长时间保持高温。
|