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1.仪器描述
仪器摆放位置：生物药学楼6#-207
固定资产编号：201350342
厂商、型号： Eppendorf公司 ，DS1500ODSS
规格参数：工作体积：400-1600 mL
转速驱动：顶端驱动，转速30-500 rpm
搅拌桨： 3个
传感器尺寸：320 mm
侧臂：2*GL45
附件及存放位置： 生物药学楼6#-207
负责人及联系方式：张宝红 34204631
2.安装系统
连接生物反应器的所有气体、电极和冷凝水，注意检查所有阀门的状态，检查pH电极和溶氧电极。pH电极一直保存在饱和KCl溶液中，使用时蒸馏水冲洗后安装使用，注意电极顶端的保护，切勿碰撞或摩擦。溶氧电极使用前检查溶氧膜的完整性，及时补充电解液。冷凝水装置要定期清洗，加入去离子水，并定期检查水位，水的质量容易造成冷凝系统的进出口小孔筛的阻塞。
3.开机
打开电脑、每个控制器、气体管道、空气压缩机、冷凝水系统、冷凝装置， 登陆电脑，登陆控制软 件。
4.创建工作流程
4.1 创建一个新的工作流程；
4.2 根据实验需要，选择控制参数；
4.3 设定使用的反应器数量1-4个；
4.4 选择工作流程的准备工作：pH校准（必选）、补料泵校准；DO校准（必选）；清洗程序。
4.5 选择要运转的反应器，状态设为free；
4.6 设定工艺参数：DO、pH、N、Gasflow、T等参数。
5.pH校准
两点校准模式：
A. 第一点校准
（1）准备pH标准液：pH4.0和pH7.0
（2）运行pH校准，点击“run” 按键，输入校准的pH；
（3）将pH点击浸入pH7.的标准液中；
（4）将温度补偿探头浸入相应的pH电极标准液；
（5）读数稳定以后，按键“Calibrate Offset”，开始第一点的校准；
（6）校准按键显示黄色圈，表示正在进行校准；显示绿色圈表示校准完成；
B. 第二点校准
（7）将pH电极取出，润洗后浸入第二个pH标准液中（pH4.0）；同时将温度补偿探头也浸入相应的电极标准液中；
（8）读数稳定以后，按键“Calibrate Slope”开始第二点的校准；
（9）校准按键显示黄色圈，表示正在进行校准；显示绿色圈表示校准完成；
C. 再次校准
（10）将电极和温度补偿探头润洗后转入pH7.0电极标准液；
（11）读数稳定以后，比较第一点校准的第一次读数，误差在0.02pH范围内；
（12）将电极和温度补偿探头润洗后转入pH4.0电极标准液；
（13）读数稳定以后，比较第二点校准的第一次读数，误差在0.02pH范围内；
（14）按键“Stop”，完成pH校准；
（15）再次校准的误差超过范围，需要重新进行校准。
6.补料泵校准
补料培养方式选用
7.灭菌
7.1 将电极安装好，反应器内装入适量的PBS缓冲液；
7.2 将所有元件用灭菌纸和锡纸包好；
7.3 灭菌。
8.溶氧电极校准
8.1 灭菌后连接所有装置，接通溶氧电极电源，极化6小时以上；
8.2 通入空气，使溶液处于空气饱和状态；
8.3 在“Std Slp”下方输入实际值，通常为100%；
8.4 打开电脑控制面板的控制开关，参数设定尽量和实验参数一致；
8.5 等到所有的PV读数稳定以后，按键“Calibrate Slpoe”;
8.6 校准按键显示黄色圈，表示正在进行校准；显示绿色圈表示校准完成；
8.7 零点校准，断开电源，读数显示为“0”；
8.8 接通溶氧电极电源，读数稳定后与第一次读数误差在2%以内即可；
8.9 按键“Stop”，校准完成。
9.细胞接种
细胞接种在生物安全柜中独立完成，按照实验设计的接种密度，每个反应器去连接以后移至生物安全柜，单独接种，尽快完成，减少溶氧电极断电时间，如果溶氧电极断电30 min以上，需重新极化。接种完成后马上连接所有通路，开始运行程序。
10.程序运行、生物反应器培养
10.1 打开Main Process View界面的所有控制开关；
10.2 分别打开每个运行的生物反应器控制界面的所有开关；
10.3 程序进入正常运行状态，细胞培养开始。
11.在线取样
11.1 准备好取样注射器；
11.2 酒精消毒取样口；
11.3 旋开取样口，放好取样帽，将注射器旋入取样口；
11.4 打开取样阀门，吸取1-2 mL，丢弃，以排掉取样管中存留样品；
11.5 再次旋入注射器，按照实验设计的取样量取样；
11.6 取样后，取样口酒精消毒，旋好取样帽，在线取样完成。
12.结束
12.1 培养完成后，将鼠标移至电脑控制面板左侧运行程序，点击右键，点击“Finish”，培养结束。可以选择每个反应器单独停止，也可以整个运行系统同时停止，根据实验情况而定；
12.2 关闭冷凝水开关，断开冷凝水进出水，注意冷凝管内的水会流出；
12.3 断开其他所有元件，及时将pH电极和溶氧电极盖好帽子；
12.4 断开补料瓶接口；
12.5 将反应器移出，收集培养液；
12.6 准备清洗反应器。
13.清洗
13.1 补料管清洗，根据补料物选择清洗试剂，一般情况下可用去离子水清洗；
13.2 清洗后排空，备用；
13.3 pH电极清洗，注意顶端保护，清洗后马上保存在KCl饱和溶液中；
13.4 分别清洗溶氧电极、取样管、通气管和罐体；
13.5 将所有元件晾干备用；
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