1.仪器描述

仪器摆放位置：生物药学楼6^#-203

固定资产编号：

厂商、型号：保兴 BIOTECH-30BSA

性能参数：

附件及存放位置：

蒸汽发生机：上海华征特种锅炉制造商，天神HX-12D-1。

干燥式无油空压机：上海硅莱实业有限公司，GA61Y。

负责人及联系方式：李朝东 021-34208024

2.灭菌

2.1 准备

2.1.1盖紧罐盖上各种盖帽，旋紧罐盖上压紧螺栓。

2.1.2标定pH、DO电极，将电极插入罐体侧面的传感器口并及时的锁紧螺母，确保安装妥当防止高压下传感器弹出伤人。

2.1.3关紧发酵罐底阀P01，倒入培养基，调整pH值，压紧投料口。

注：氯离子对不锈钢会带来不可逆转的破坏，因此应避免用盐酸溶液调节pH，如工艺上无法避免加盐酸，应控制盐酸溶液浓度不大于5%且在添加过程中不得直接接触不锈钢。

2.2培养基自动消毒

2.2.1预先启动蒸汽发生器及空气压缩机。设定控制器消毒画面中的各阶段温度和保温时间

2.2.2按“自动消毒阀门状态表”开关手动部分的阀门，关闭其它阀门。

2.2.3启动反应器搅拌马达。调转速100~200rpm。

2.2.4自动消毒：在控制器消毒画面中点击“启动消毒”，发酵罐消毒进入自动消毒状态。各阶段阀门开关情况详见“阀门状态表”。

2.2.5蒸汽进取样阀：自动消毒过程中可以对取样阀消毒，开出料阀P02(关紧出料阀P01)，开蒸汽阀S03，蒸汽进入取样阀内腔，当阀P02排尽冷凝水后应调节其开度，以有少量蒸汽排出即可。保温结束前关P02，S03。

2.3灭菌完成及降温

2.3.1保温结束后，当罐温度低于110℃（可设定）空气进气阀A03自动开，空气进入发酵罐。人工关闭冷凝水阀V02以减少空气浪费。

2.3.2消毒结束后将自动进入待用状态，因此应在消毒画面中将阶段7 中的温度设定为发酵接种前的温度。

2.3.3调整进气阀A01、排气阀VT01,维持罐压为0.05Mpa左右。

3.发酵操作

3.1准备

3.1.1溶氧电极标定：调节空气流量、罐压、搅拌转速、罐温(为了保证工艺参数的可比性，建议上面四参数维持一个固定值)，标定溶氧电极斜率为100%。

3.1.2 pH电极零点校正:高温消毒后pH电极的零点或多或少都会发生漂移,应预校正。取样用外源pH电极精确测定培养基的pH值，根据精确测定值与在线的pH值的差值在标定菜单中直接修改零点，使在线值等同精确测量值。

3.2接种

3.2.1摇瓶倒种：调节进气量至0.2VVM，开排气阀VT1至罐压接近零(不得大于0.02Mpa)，予先旋松接种口，在接种口处放好火焰圈并点燃(在火焰圈中放置少量的棉花可以助燃提高火焰的高度)，打开接种口，倒入种子，然后旋紧接种盖，立即调高罐压。

3.2.2发酵初始化：在控制器的发酵罐状态画面输入“发酵批号”，再按“就绪”或”开始”并“确认”，发酵数据才能自动保存。设定发酵过程参数及适宜的控制模式。      

3.3补料

3.3.1将经灭菌消毒的补料瓶及输液管放置于搁架上，用手动方式转动蠕动泵泵头，将输液管沿蠕动泵转动方向嵌入蠕动泵内。并用蠕动泵壳内的夹子夹紧软管。

3.3.2旋下补料口上闷头，用酒精棉球对补料口内橡胶塞外表面消毒，然后将针头插入并穿透密封盖，并用补料针上的螺母锁紧。

3.3.3打开蠕动泵手动开关，使输液管中充满料液。置蠕动泵开关于自动状态。根据发酵工艺要求设定控制方式及控制周期和脉冲。

3.3.4酸碱液、消泡剂操作同补料操作。补料方式有多种,应根据工艺要求选用恰当的补料方式。

3.4取样

3.4.1取样器消毒：半开阀P02，开蒸汽阀S03，，蒸汽进入取样器，消毒时间5-10分钟。

3.4.2关蒸汽阀S03，全开出料阀P02，准备取样。

3.4.3逆时针转动取样阀P01手柄，进行取样。回转手柄，取样结束。

3.4.4 开蒸汽阀S03，冲洗取样器，，关阀S03。取样结束。

3.5放料 放料是通过底部放料口放料，转动手柄开阀P03即可放料。若需收集无菌料操作同取样操作。

3.6发酵结束。发酵结束必须在控制器在控制器的发酵罐状态画面按“正在发酵”并“确认”后显示“发酵结束”， 发酵数据将自动整   理并保存。

4.管路说明

   该流程图中空气管路阀门标号为“AX X”，蒸汽管路阀门标号为“SX X”，冷却水管路阀门标号为“WX      X”，冷凝水管路阀门标号为“VX X”，电磁阀标号为“CX X”， 物料管路阀门标号为“PX X“，冷冻水    管路标号“CW X”， 纯化水管路标号“D X X”，其它气体管路标号“NXX”。

4.1空气及净化

   来自空压机的压缩空气经净化器(外接减压稳压器、除水、除尘、空气予过滤器)进入发酵罐空气总管，空    气阀A01、空气流量计、阀A02、空气过滤器、阀A02、单向阀，到达反应器内，尾气经阀VT1排出(旁路      VT3、VT2排出)，本管路具有计量、净化作用。注：空气流量显示的流量是以过滤器前的压力下的流量，    不是标准状态下的流量。

4.2蒸汽

4.2.1蒸汽进罐或过滤器。蒸汽经阀S12、S02进入空气管线，经阀A03进入发酵罐同时进入过滤器经排水阀V02排出。

4.2.2蒸汽进取样阀及放料阀。蒸汽经阀S03进入取样阀和罐底，由阀P02排出冷凝水。

4.3冷凝水

4.3.1 冷(却)冻水进夹套。当电磁阀C01打开时，冷冻水进入夹套。 当电磁阀C02打开时，冷冻水进入换热器对夹套水冷却。  特别提示：温度自动前必须对夹套注水。开阀W01和注水开关对夹套注水 注意：消毒后用自用自来水冷却并将热水排入地沟，发酵时可用冷冻水。

4.3.2冷冻水经阀W04进入排气冷凝器对尾气冷却，返回冷冻水回路。注意事项：设备闲置时或冰冻天气应排尽夹套水并保持夹套排污阀和罐体排气阀处于全开状态。

5.注意事项

5.1消毒前进气阀A01开度不可太大，否则可能引起空气总管压力低于0.4Mpa导致气动阀无法工作。

5.2灭菌完毕，请勿关闭蒸汽发生器，取样时需要用蒸汽。

5.3发酵过程应经常开空气过滤器排水阀V01排冷凝水，根据空气含水工况调整开阀的频率。

5.4发酵过程自动控制温度时应开夹套内盘管蒸汽阀、冷凝水阀V07。

5.5 做好仪器使用记录。