1.仪器描述
仪器摆放位置：生物药学楼6#-205
固定资产编号：201343995
厂商、型号： 通用电气集团 AKTApurifierTM 100
性能参数：
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AKTApurifier 100
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重现性
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+-0.01 nm
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流速范围
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0.01-100 ml/min
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线性
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<2%（在260 nm，样品尿嘧啶，pH=2，紫外吸收上升到2 AU时）
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压力范围
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0-10 MPa
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噪音
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<6×10-5 AU（230 nm）
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电导范围
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1 µS/cm - 999.9 mS/cm
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漂移
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<2×10-4 AU/h (254 nm)
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pH范围
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2-12
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最大压力
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2 MPa (20 bar, 290 psi)
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温度范围
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4℃-40℃
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pH/C-900 pH/电导检测器
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体积
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500 mm×460 mm×620 mm
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电导单元
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重量
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75 kg
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电导范围
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1 µS/cm-999.9 mS/cm
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P-901泵
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噪音
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+- 0.5%(满刻度校准范围内)
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流速范围
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0.01-100 ml/min
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pH单元
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增量
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0.01 ml/min
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pH范围
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0-14（有效使用范围2-12）
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压力范围
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0-10 MPa (100 bar, 1450 psi)
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精度
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+- 0.1 pH单位，温度补偿
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体积
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< 1800 µl/pump module
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稳定性
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最大偏移0.1 pH单位/10小时
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粘性
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最大5 cP
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收集器 FRACTION COLLECTOR FRAC-950
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UV-900紫外光/可见光检测器
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pH范围
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1-13
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波长范围
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190-700 nm
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时间模式
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0.1-99999.99 min
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检测波长
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同时检测3个波长
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容量
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120管（18 mm），8管（30 mm）
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波长可调范围
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1 nm
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流速
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0.001-100 ml/min
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带宽
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4 nm
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操作温度
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4℃-40℃
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波长精度
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+-2 nm
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深度
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550 mm
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相对湿度
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20%-95%（不能冷凝）
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负责人及联系方式：李宁环 34208024
2.开机
打开主机和电脑电源，待仪器自检完毕（CU950 上面的 3 个指示灯完全点亮不闪烁），双击桌面上 UNICORN 图标，进入操作界面。
3.准备流动相和样品
所有的工作溶液和样品必须经过 0.45µm 的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中 含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气 10min。
4.清洗管道及装柱
4.1 首先将 A1 管道放入平衡液或 banding buffering 中，将 B1 管道放入高盐溶液中或 elution buffering 中，在 system control 窗口点击 manual→pump→pump wash basic，选中 A1,B1 管道为 ON， execute。泵清洗程序会自动运行结束。
4.2选择manual→pump→flow rate，输入流速 1ml/ml，insert；选择 manual→Alarm&mon→alarm pressure，设置 high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。 将进样阀的 1 号位管道接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉，直接拧入紫外流动池或连 接管道。
5.手动运行
5.1平衡
柱子平衡好了（观察电导 COND，pH ，UV的数值正确曲线走稳了）。此时将紫外调零，选择 manual→Alarm&mon→autozero，exectue，就准备上样了。
5.2上样
5.2.1 用样品环上，将样品吸进注射器，推掉气泡，从进样阀的 3 号位推入（进样量不得低于样品环 的体积的2倍），不要取下注射器。选择 manual→flowpath→injectionValve→inject，execute。
5.2.2 用样品泵上样（AKTAexplorer 系统），将样品置于 Sample Valve 1 号位（可以选 8 个不同 的位置），点击 manual→pump→Direct Load_960 输入进样流速和体积，execute。注意样品的管路 要事先充满缓冲液。
5.2.3 用系统泵上样：点击 pause，将 A1 放入样品中，点击 continue；待样品上完后，再将 A1放 入到平衡液中继续清洗柱子。
5.3 洗脱
用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。选择 manual→pump→gradient，按照自己的条件选择 target ％B（例如 100％）和 length（例如 20min），execute。
5.4 收集
5.4.1 固定体积收集：
选择 manual→Frac→fractionation_900,输入每管收集体积，exectue。结束固定体积收集选择 Frac→fractionation_stop_900，exectue。
5.4.2 峰收集：
选择 manual→Frac→Peak_FracParametersUV，输入峰收集参数，insert，点击 Peak_Fractionation_900，输入每管最大收集体积，insert，exectue。结束峰收集，选择 Peak_FracStop_900,execute。
6.编程及自动运行
6.1 点击 mothed editor 窗口里工具栏的 mothed wizard 快捷图标，打开对话框。
6.2 按照对话框的要求选择条件，编好后按 finish 出现编程结果，在变量框中可以更改变量。保存 点击工具栏里的保存快捷图标，输入文件名，点击 ok。
6.3 运行自动程序：在 system control 窗口点击工具栏中的 RUN 打开编好的方法，点击 next 直到 start 开始运行。
6.4 运行中，按下工具栏上的 hold 键表示保持目前的运行模块状态不进入到下一个命令中。点击 manual→other→next breakpoint 表示进入到下一个模块指令。
6.5 运行结束后，结果自动保存。
7.清洗系统及拆柱
将 A1 和 B1 入口放入纯水中，启动 pump wash purifier 功能冲洗 A 泵和 B 泵及整个管路。然后 再将 A1 和 B1 入口放入 20％乙醇中，同样操作将乙醇冲满整个管路保存。系统给柱子一个慢流速， 设置系统保护压力，然后先拆柱子的下端，拧上堵头，再拆柱子的上端，拧上堵头。
8.关机
从软件控制系统的第一个窗口 unicorn manager 点击退出，其他窗口不能单独关闭。然后关闭AKTA 主机电源，关闭电脑电源。
9.注意事项
9.1 所有的工作溶液和样品必须经过 0.22 µm的滤膜过滤。当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲 醇），需在使用前用低频超声脱气 10min。缓冲液和样品过滤并超声处理时间超过12 h需重新进行过滤 和超声处理。
9.2 样品尽量不要带有颜色，尤其是深颜色样品，有颜色样品应进行脱色处理。绝对禁止使用带颜色 的样品直接上凝胶柱。
9.3 使用时务必要设置报警压，该压力最好低于预装柱（填料）的上限压力。
9.4 预滤器中的滤膜应定期更换。
9.5 使用者应随时注意操作过程中的压力及其他参数变化，若发现参数不稳定应及时向负责人反应。